液相色谱仪操作及原理
发布时间：
2024-03-08
液相色谱仪根据固定相是液体或是固体，又分为液-液色谱(LLC）及液-固色谱(LSC）。现代液相色谱仪由高压输液泵、进样系统、温度控制系统、色谱柱、检测器、信号记录系统等部分组成。与经典液相柱色谱装置比较，具有高xiao、快速、灵敏等特点。
一、液相色谱仪
液相色谱仪根据固定相是液体或是固体，又分为液-液色谱(LLC）及液-固色谱(LSC）。现代液相色谱仪由高压输液泵、进样系统、温度控制系统、色谱柱、检测器、信号记录系统等部分组成。与经典液相柱色谱装置比较，具有高xiao、快速、灵敏等特点。
二、液相色谱仪的特点
1、高压：液相色谱法以液体为流动相（称为载液），液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，要对载液施加高压。一般可达150～350×105Pa。
2、高速：流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1～10ml/min。液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于1h。
3、高灵敏度：液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。如荧光检测器灵敏度可达10-11g。另外，用样量小，一般几个微升。
4、适应范围宽：气相色谱法与液相色谱法的比较：气相色谱法虽具有分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。而液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。
三、液相色谱仪操作五步骤
1、准备
①准备所需流动相，用合适的0.45滤膜过滤，超声脱气20min。
②根据待测样品的需要更换合适的色谱柱（注意方向）和定量环。
③配制样品的标准溶液，用合适的0.45um滤膜过滤。
④检查仪器各部件是否连接正常，其中包括电源线、数据线、地线以及输液管道。
2、开机
①接通电源，一次打开检测器、输液泵，待检测器自检结束，显示测量状态时再打开电脑、打印机及电脑显示器等。
②更换流动相并排气泡。
③将管路的不锈钢过滤头放入装有准备好的流动相储液瓶中
④逆时针转动泵的排空阀，约半圈，之后拧松排空阀
⑤按输送泵（purge）键，绿灯亮时开始以5.0ml/min流速冲洗约2分钟，管路无气泡时按下（stop）键，重新设定流速值。
3、设计参数
①流速设定
②波长设定
③设定完成按运行（run）按键
④色谱工作站操作：依次执行→打开“在线工作站”→“通道1”→“OK”→“数据采集”后进行零点校正、查看基线，确定基线稳定后关闭查看基线可以进样。
4、进样
①进样前将（A/Z）检测器按键调零查看基数是否在0mv，有偏差则（零点校正）按键进行调试
②用样品清洗注射器、排除气泡、抽取适量后将手动进样阀杆调到（Load）位置，样品注入进样阀后调到（Inject）位置，以此进样操作步骤完成，进入在线工作站自动采集数据流程。
5、系统清洗
由于分析样品时流动相系统中含有缓冲盐类物质，需使用百分之十甲醇水溶液，以1.0ml/min冲洗40分钟后更换甲醇试剂，以同样1.0ml/min冲洗40分钟，（stop）按键停泵，关机。
四、液相色谱仪工作原理
首先，流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内。由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。高xiao液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统。液相色谱仪也常以吸附柱色谱法、分配柱色谱法、离子交换柱色谱法、凝胶柱色谱法，四类根据工作原理命名的色谱法来区分。
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